茶藝方法精選(五篇)

序言：作為思想的載體和知識的探索者，寫作是一種獨特的藝術，我們為您準備了不同風格的5篇茶藝方法，期待它們能激發您的靈感。

篇1

關鍵詞：茶藝；儀態；練習；有效

中圖分類號：G633.3 文獻標識碼：B 文章編號：1006-5962（2013）08-0046-01

茶藝是一門內涵豐富，涵蓋茶葉栽培、茶葉加工、茶葉沖泡、品茶養生、茶藝表演等多方面內容的學科，隨著現代生活水平的提高，飲茶的人越來越多，人們對茶的要求也越來越高，從飲茶解渴到飲茶養生再到品茶賞茶藝表演，藝術元素的滲入，使茶人從嗅覺、味覺享受，擴延到視覺、精神享受。在茶藝表演過程除了茶葉量、水溫、水量、杯具、沖泡時間等沖泡技藝外，得體優雅的儀態會使一杯好茶錦上添花，使品茶人進入了另一個藝術欣賞心靈滌蕩的更高境界。

茶藝表演過程中，表演者既要進行一系列繁鎖的沖泡動作，又要端茶給品茶者，所以儀態是茶藝表演的關鍵因素之一，在茶藝學習課程上，本人認為有必要安排2到6個課時進行表情、坐姿、站姿、步姿、手勢等儀態的練習，不可只局限于老師的口頭講述示范、視頻的觀摩。如何利用好有限的課堂時間進行有效的練習，本人將從練習意識、練習場所、練習方法、練習過程、考核方法等多方面來探析有效練習課堂的開展。

1 引導學生找出差距

只有同學們思想上認同了儀態在茶藝表演中的重要性，找出自己的不足，同學們才會主動認真練習，才會在行動中實踐，才能使練習的有效性提高。所以我們在進行儀態課之前，要先引起同學們的共鳴，我們可以用手機或相機攝影幾個同學的沖泡過程，然后播放給大家看，再播放茶藝師的茶藝表演，讓同學們對比點評找出差別，因同學們是初學者，與茶藝師的表演儀態肯定會存在很大差距，引導同學們認識到自己的不足，不敢忽視接下來的儀態練習。

2 選好練習場所

一般的茶藝課堂在課室或茶藝室內進行，但儀態課，我們最好選擇在形體舞蹈室，因為形體舞蹈室四面墻壁有鏡子，學生練習時，可以在鏡子里看到自己的姿勢儀態，更容易找出自己的儀態優缺點，學習速度更快，這對練習的有效性事半功倍。

3 設計好練習方法、掌控好練習過程

老師示范了正確的姿勢后，就到學生練習了，開始練習前，就告知學生練習結束后將進行小組儀態比賽，選出每組的儀態大使和本班的冠亞季軍，利用學生的表演欲和不甘落后的自尊心，進一步挑起學生的練習熱情。

至于練習方法，如果讓學生在課堂上自由練習，很容易出現靠邊站聊天的懶散現象，本人認為要采用集體統一練習，且不同的學習內容練習過程也應不同。

微笑表情：我們可以把學生分成幾個小組，分小組時盡量以宿舍為單位來分，因為放學后，學生回到宿舍，相互交流時很容易聊起課堂練習情景，相互之間有更多共同語言，并在交流中很自然地進行練習，讓練習課堂延伸到宿舍，且每小組選出的儀態大使就是本宿舍成員，更有親切感，也會使學生感到儀態大使就在身邊，時刻要注意儀態。

老師示范結束后，讓學生臉朝鏡子練習微笑，在鏡子中找出不露齒和露齒的最好看的微笑，以及微笑時的目光，老師需在旁叫口令"一二三，開始微笑，1、2、3……10"，老師通過數數強迫每個學生都練習。讓學生休息幾秒后，這樣的數數練習可再進行，如此重復幾次后，就進入下一內容的練習，重復的次數不可太多，因為次數多了，學生會覺得枯燥無味，變成應付式的練習，而不是有效的練習。

站姿：老師示范完后，可采用微笑練習的方法，讓學生分成幾個小組分別臉朝向鏡子，老師進行數數的強迫性練習，數數的過程，老師可不能閑著，應到站姿不好的學生旁給以指正。因為女性腳的方向可以左丁、右丁、小八字幾種站法，手也有幾種擺放，所以在練習過程中要把不同的站法也要練習上幾遍。盡量讓學生在課堂上就牢固掌握各種站姿。練習站姿時應要求學生配以微笑的表情。

步姿：步姿涉及的手腳動作多，老師示范和學生練習都應分解各動作。如手臂擺動，動作是肩膀和上半身不動，雙臂自然下垂，手掌心向內，手臂以身體為中心前后擺動，女性手臂與身體的夾角約10°-15°，可讓學生站在原地，只進行手臂的擺動練習，我們還是采用統一的數數強迫練習。又如腳步的跨步練習，除了分解動作還應放慢動作，讓學生找到跨一步的一只腳或1.5只腳的距離是多少，還應在地面畫兩只腳寬的平行線，讓學生在平行線上走，找出兩只腳沿平行方向走的感覺，規避外八字內八字的不雅走姿。分解動作練習完進行連環動作練習時，為方便老師看清每個學生的情況，最好把學生分成幾列，一列一列的單獨進行。練習步姿時應要求學生配以微笑的表情。

坐姿：因為茶藝表演時大部份時間是坐著進行的，所以坐姿應作為練習的重點，練習所占時間應較長。老師一定要把坐姿入座離座等內容作詳細的分解講解并一一作示范，一定要讓學生明晰每個身體部位的動作要領，學生練習時也要對各分解動作一一練習，同時，坐姿腳的放法和手的放法有多種，所以在練習過程要對每種坐法進行練習。

準備每人一張椅子，可參考微笑練習的方法，讓學生分成幾個小組分別臉朝向鏡子，進行數數的強迫性統一練習，練習坐姿時應要求學生配以微笑的表情。

所有內容練習完后，可以進行比賽，一組一組的進行各種姿勢儀態的展示，結合同學們的意見和老師的意見選出每組的儀態大使和本班的冠亞季軍。

4 利用好考核方法

為了增加學生對練習的重視，可在練習課結束后，馬上安排時間對練習的幾種姿勢儀態內容進行考核，考核成績作為學科成績的一部份。

良好的儀態會給人一種美的享受，良好的儀態在茶藝表演中給人一種欣賞藝術的享受，所以我們在茶藝課堂教學中不可忽視對學生儀態的教學，為了使學生牢固掌握此內容，我們一定要重視課堂練習的有效性，我們要從培養練習意識、選好練習場所、設好練習方法、控好練習過程、用好考核方法等多方面入手，提高茶藝表演儀態課堂練習的有效性。

參考文獻

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[2] 范增平.茶藝美學論[A].廣西民族學院學報（哲學版），2012.

篇2

2、移植換盆：可于新芽萌發前移植或換盆為宜；約于11月至3月間。

3、灌溉給水：喜濕潤、排水良好。故應適時給水，尤其應防夏季缺水的西曬乾燥現象或建物輻射熱傷害，以免妨害其生長。當花芽分花時，更不可斷水、缺水，以免著花不易或引起落花。

4、施肥：可以有機質肥為主供應：骨粉、草木灰、油粕。或過磷酸石灰、氯化鉀。其n—p—k比為：5—3—2，開花后可施重肥，5～7月花芽分化期間忌施肥，尤其是氮肥，以免僅萌發葉芽。

5、摘蕾：茶花的花芽分化多為六月間，但摘蕾時須視花蕾如黃豆一般大小時約在9～11月間才可進行。摘蕾的原則為：每節花芽僅留一個花蕾為原則，且其花蕾須朝上，并不可傷及新芽。

6、花后處理：12～1月間：花后應盡早除去殘花，并立即追肥，在支干基部起僅保留2～3節新芽，其余頂端可去除。4～5月間：須減少供水，使新芽所生長之枝條不會過分伸長，以免后續之花芽分化的萌花蕾數減少。

篇3

為貫徹落實市紀委九屆八次全會、市政府廉政工作電視電話會議和全市推進懲治和預防腐敗體系建設工作會議精神，進一步推進依法行政，根據省監察廳《關于在全省住房與城鄉建設和國土資源系統開展依法行政綜合監察工作的通知》（監發[]2號），經市政府同意，決定在全市建設、規劃、房管、城管執法和國土資源系統開展依法行政綜合監察工作。

一、監察任務、內容和重點

（一）監察任務

按照分級監察的原則，對市、縣（市）區兩級建設、規劃、房管、城管執法和國土資源行政主管部門，年以來依法履行職責的情況進行全面監察，促進五個部門深入推進依法行政，規范行政權力運行，有效發揮行政監管和服務職能，防止濫用權力。

（二）監察內容

1、檢查各級建設、規劃、房管、城管執法和國土資源行政主管部門年以來在實施行政管理中，是否依法履行行政許可、規劃、處罰、強制、確認、裁決、征收、給付、復議和監督檢查等職責。具體包括：

——是否合法行政，有否存在越權、失職瀆職的問題；

——是否合理行政，有否存在不公平、不適當和濫用自由裁量權的問題；

——是否程序正當，有否存在應公開不公開、應告知不告知、應回避不回避等違反法定程序的問題；

——是否高效便民，有否存在超時限、推諉扯皮、效率低下及違反便民規定的問題；

——是否廉潔自律，有否存在亂收費、的問題。

既要對具體行政行為進行檢查，也要對抽象行政行為進行檢查，全面掌握被監察部門依法行政的情況。

2、根據檢查結果，對依法行政的好經驗、好做法予以總結推廣；對違法違規和違反政策規定的問題，督促糾正和整改；對違紀問題，依紀依法進行調查處理。

（三）監察重點

1、對建設行政主管部門，重點監察城市建設管理、工程建設質量、安全管理、工程建設項目招投標監管、資金規費收支管理、建筑業資質管理。

2、對規劃行政主管部門，重點監察城鄉規劃管理。

3、對房管行政主管部門，重點監察城鎮房屋拆遷、房地產管理、物業管理。

4、對城管執法行政主管部門，重點監察城市管理行政執法、市容和環境衛生管理、內河管理、市政管理。

5、對國土行政主管部門，重點監察用地審批、土地出讓、土地開發整理、土地違法違規案件查處；探礦權、采礦權審批與出讓；資金規費收支管理。

二、監察工作安排及方法步驟

（一）工作安排

5月至9月，各級監察機關及其派駐建設、規劃、房管、城管執法和國土資源行政主管部門的監察機構，對本級建設、規劃、房管、城管執法和國土資源行政主管部門進行綜合監察。各縣（市）區監察局于9月20日前，向市監察局報送本轄區開展建設、規劃、房管、城管執法和國土資源系統綜合監察工作的情況報告。市監察局于9月30日前，向省監察廳報送本轄區開展建設、規劃、房管、城管執法和國土資源系統綜合監察工作的情況報告。

（二）方法步驟

1、各級監察機關向本級建設、規劃、房管、城管執法和國土資源行政主管部門發出監察通知書，告知監察內容、重點、時間等事項，請其做好相關準備工作。

2、實施檢查，形成檢查報告。具體檢查方法：

——聽。通過召開匯報會、座談會和個別聽取意見等形式，向建設、規劃、房管、城管執法和國土資源行政主管部門及其管理相對人了解依法行政的情況，聽取意見、建議。

——閱。查閱建設、規劃、房管、城管執法和國土資源行政管理的相關工作資料，包括：制定出臺的規范性文件；有關行政規劃、許可、審批、確認、裁決的檔案資料；受理投訴、查處案件、辦理行政復議等行政執法的卷宗資料；有關規費的征收、上繳和補助的分配、使用的憑證、賬冊和批文；其他有關資料。

——看。現場查看建設、規劃、房管、城管執法和國土資源行政服務窗口、基層所站的工作運作情況。

——理。在建設、規劃、房管、城管執法和國土資源行政主管部門及其辦事窗口公布舉報電話，認真受理并調查核實群眾投訴、反映的有關問題。

3、根據檢查結果，充分運用監察建議書、決定書等監察手段，認真行使建議權、處分權等監察職權，抓好經驗總結、問題整改、案件查處等事項，確保推進依法行政目標的實現。

4、向本級人民政府和上一級監察機關書面報告開展綜合監察工作的情況。

三、監察工作的主要依據

（一）建設

《中華人民共和國建筑法》、《中華人民共和國招標投標法》、《中華人民共和國城市房地產管理法》、《建設工程質量管理條例》、《建設工程勘查設計管理條例》、《建設工程安全生產管理條例》、《住房公積金管理條例》等。

（二）、規劃

《中華人民共和國城市規劃法》、《省實施〈中華人民共和國城市規劃法〉辦法》等

（三）、房管

《中華人民共和國城市房地產管理法》、《中華人民共和國物權法》、《城市房屋拆遷管理條例》、《市城市房屋拆遷管理辦法》等

（四）、城管執法

《省城市市容和環境衛生管理辦法》、《市市容和環境衛生管理辦法》等

（五）、國土資源

《中華人民共和國土地管理法》、《中華人民共和國礦產資源法》、《中華人民共和國土地管理法實施條例》、《基本農田保護條例》、《中華人民共和國城鎮國有土地使用權出讓和轉讓暫行條例》、《劃撥土地使用權管理暫行辦法》等。

（六）綜合

《中華人民共和國行政監察法》、《中華人民共和國行政監察法實施條例》、《中華人民共和國行政處罰法》、《中華人民共和國行政復議法》、《中華人民共和國行政許可法》等。

四、監察工作要求

（一）加強領導。開展依法行政綜合監察是加強對行政權力運行的監督，推進依法行政的重要措施，對加強廉政勤政建設，優化發展環境，促進經濟社會發展具有重要意義。各級監察機關要把開展建設、規劃、房管、城管執法和國土資源系統綜合監察作為今年執法監察的重要任務，列入重要議事日程，切實加強領導。要按照綜合監察的任務、內容和重點，結合本轄區建設、規劃、房管、城管執法和國土資源系統實際，制定工作方案，認真組織實施。要抽調素質高、能力強的干部組成監察組，充分發揮派駐機構的作用，確保綜合監察工作深入開展。要向政府報告綜合監察方案及其結果，實施中遇到重要情況和重大問題要及時向政府請示，取得政府的指導；要向建設、規劃、房管、城管執法和國土資源行政主管部門宣講綜合監察的目的、意義，取得他們的理解、支持和配合。市監察局分別組成建設、規劃、房管、城管執法和國土資源5個系統依法行政綜合監察組，組長由市監察局分管副局長擔任，副組長分別由市紀委監察局執法監察室主任和市紀委駐市建設局、市城市規劃局、市房管局、市城管執法局、市國土資源局紀檢組組長擔任，負責綜合監察工作的組織實施。

（二）依法監察。各級監察機關要嚴格依照《行政監察法》及其《實施條例》、《省監察機關檢查工作辦法》開展綜合監察工作。在檢查環節，要按照《省監察機關檢查工作辦法》的有關規定辦理立項、實施檢查、進行處理；在調查環節，要嚴格依照紀檢監察機關辦案程序進行審查、立案、調查取證、審理和執行。

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關鍵詞：數學教學；銜接；差異；方法

當前，“九年制義務教育”課程標準倡導“人人都能獲得良好的數學教育，不同的人在數學上得到不同的發展”，使得初中數學教學普遍執行的是課程標準的基本要求，而淡化了為學生的升學而應做的必要準備。進入高中以后，其課程標準難度提高，教材內容多，導致了學生學習困難，教師較難進行有效教學。究其主要原因是二者差異較大。筆者從實踐中深刻地體會到，解決此問題的關鍵是“關注差異，注重方法”，努力搞好初、高中數學教學的銜接。

一、關注差異，有的放矢

1.知識差異

初、高中數學有很多銜接的知識點。如命題、函數概念、不等式等。因此，在講授新知識時，教師要引導學生復習和區別舊知識，注重對那些易錯易混的知識點加以分析、比較，從而達到溫故而知新的效果。例如，在學習一元二次不等式解法時，教師應引導學生回顧已學過的一元二次方程和二次函數的有關知識，如：根的判別式，求根公式，根與系數的關系，二次函數的圖像等。初中數學知識少、淺、難度較低。高中數學知識面廣，是對初中的數學知識推廣、延伸和完善。如，初中學習的角的概念只是“0°～180°”范圍，但實際當中有720°和“負300°”等角，為此，高中將把角的概念推廣到任意角。又如，初中一個負數開平方無意義，但在高中規定了i2=-1，就使-1的平方根為±i。即可把數的概念擴大到復數范圍。

2.教學差異

（1）初中課堂教學容量小、知識淺顯，教師通過精講多練，課后作業，反復練習，大多數學生能夠掌握。而高中數學的學習隨著課程開設多，課時減少，課外練習時間也相對減少，這樣集中教學的時間相對比初中少，教師又很難像初中那樣督促每個學生的作業和課外練習了。

（2）初中學生模仿做題，模仿老師思維推理較多，而高中學生也有模仿做題和推理思維，但隨著知識廣度和難度的增加，全部模仿難能維系了，為了避免學生高分低能，思維定式，提倡創新思維和培養學生的創造能力，已是高中數學教學的必然了。

3.自學差異

初中學生自學能力較低，但凡考試涉及的題目，基本上是教師耐心的講解和學生大量的訓練，學生很少自學。但高中的知識面廣，要全部由教師訓練完高考中的習題類型是不可能的，只有通過較少的、較典型的題例講解讓學生去融會貫通。如果不自學、不靠大量的閱讀理解，學生將會一籌莫展。

二、注重方法，事半功倍

1.注重教學方法的銜接

（1）創設問題情境，揭示知識的形成與發展過程。在數學知識的講授過程中，不僅要讓學生知其然，更應讓學生知其所以然，高中數學教學尤其如此。這就要求高中教師在初、高中數學教學銜接時，注意創設問題情境，講清知識的來龍去脈，揭示新知識（概念、公式等）的提出過程，例題解法的探求過程，解題方法和規律的概括過程，使學生對所學知識理解得更加深刻。

（2）運用探究式教學，使學生主動參與。貫徹新課程理念，發揮學生的主體地位，讓學生主動參與對數學的學習和思考，踐行陶行知的“在做中學”理念。如在立體幾何教學中，讓學生課外制作棱柱、棱錐等幾何體，感受幾何體的形狀和性質；在講橢圓定義時，讓學生畫出橢圓，要比教師直接給出橢圓定義效果要好得多， 通過學生主動參與和探究式的教學，引發其好奇心和濃厚的興趣，他們就會主動學習、積極思維，參與活動的同時也激發了想象力和創造力。

（3）重視知識歸納，培養邏輯思維能力。合理的知識建構，有助于思維由三維向多維發展，從而形成網絡結構。在復習中要把握知識的內在聯系，形成清晰的知識結構圖表，以便理清概念，使其系統化、條理化，便于記憶及掌握運用，同時對所學的思維方法和解題方法也應進行分類總結，找出其共性與個性，學生的邏輯思維能力也就蘊涵其中，并得以有效的培養和提高。

2.注重學習方法的銜接

（1）要培養良好的學習習慣。良好的學習習慣，包括制訂計劃、課前自學、專心上課、及時復習、獨立作業、糾錯訂正、質疑問難、系統小結和課外學習和反思習慣，從而提高自學能力、發現和分析、解決問題的能力。尤其是解完題目之后，及時回顧解題過程中是如何分析聯想探索出解題途徑的？使問題獲得解決的關鍵是什么？通過解題后的回顧與反思，更有利于發現解題的關鍵所在，并從中提煉出數學思想和方法。因此，培養良好的學習習慣才能“站得高，看得遠，駕馭全局，理想效果”。

（2）要夯實基礎，探索規律。首先必須掌握好課本的基礎知識，一切問題的解決都是建立在一個一個的最基礎的知識點上的，如果連最基礎的知識點都不會，那還如何解決問題呢？因此學數學同樣需要記憶，并且是牢固的記憶。其次，在解決問題中探索規律，同一類型的題目，這次錯了，下次就會做了，規律是總結出來的。可以從練習、例題中實踐總結，還可以從一些經典易錯題中歸納總結。規律理解和掌握得多了，就能像一把鑰匙開一把鎖，得心應手，迎刃而解啦。

處理好初、高中數學教學的銜接問題，是推進高中數學新課標教學的切入點和增長點，筆者雖然進行了一些有益的探索，但與落實新課標，培養新型人才的要求還有差距。“路漫漫其修遠兮，吾將上下而求索。”關注差異，注重方法，有機銜接，有效發展，愿我們的高中數學教學更上一層樓，結出豐碩之果。

參考文獻：

[1][蘇]巴班斯基.教育過程最優化[M].吳文侃等，譯.教育科學出版社，2001-01.

[2][美]D.鮑里奇.有效教學方法[M].易東平，譯.江蘇教育出版社，2002.

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一、DD方法基本原理

DD的基本原理是將具有可比性的細胞在某一條件下可表達的mRNA群體通過逆轉錄方法變成相應的cDNA群體，以此為模板，利用一對特殊引物，即3anchor引物和5arbitrary引物，在一定條件下進行PCR擴增，得到與mRNA相對應的“標簽”（tags），然后用變性聚丙烯酰胺測序膠分析其差別，將有差別的基因克隆化，進一步分析其結構與功能。DD依賴三種技術：（1）mRNA逆轉錄技術；（2）以特定引物進行的PCR技術；（3）DNA測序膠電泳技術。

二、DD方法的優點及其應用

用某一方法來尋找mRNA表達的差異，至少要滿足下列要求：（1）在一定時間、空間里，每一個細胞約有15000種mRNA表達，其中除少數屬高豐度表達外，大量的屬于低豐度表達，即要求使用的方法足以顯示低豐度mRNA；（2）重復性要好；（3）實驗過程中能夠步步驗證比較（side-by-sidecomparison）；（4）得到的產物能代表相應的mRNAs或cDNAs，并能由此找到相應的cDNA序列；（5）省時，簡便易行。

既往對mRNA的比較研究中多用減數雜交方法［4］（subtractionhybridization），該方法靈敏，可顯示低豐度RNA，但是步驟復雜，需時較長，而且在得到最終結果前無法步步驗證對照比較，故不易重復，并且需要大量的RNA作起始研究材料。這一點對RNA來源不易者（如手術活檢標本）極不利［5，6］。

DD的優點在于：（1）僅需0.2μg總RNA作為起始材料；（2）可同時分析多組樣品；（3）敏感性高，可檢出低豐度mRNA；（4）實驗周期短，約8天即可完成［7］，便于重復；（5）最突出的優點是實驗過程中可步步驗證比較。可簡單地將DD的特點概括為“3SRV”，即“Simplicity，Sensitivity，Speed，Reproducibility，Versatility”。

DD方法因有上述優點，被廣泛應用。例如：Musholt等［8］應用DD方法對手術切下的髓樣甲狀腺癌標本與局部轉移的淋巴結進行了比較，發現了兩個新的表達基因MDF-1和MDF-2，并認為這兩個基因在髓樣甲狀腺癌的進展與轉移中起了重要作用；Zuo等［9］研究潰瘍性結腸炎的粘膜細胞，以正常結腸粘膜細胞作對照，找到了25個表達基因，其中有些與甲狀旁腺瘤、T細胞受體-β、卵巢癌等表達的基因同源。

關于神經再生問題，Livesey等［10］發現了Reg-2基因，并認為該基因是哺乳類動物運動神經元再生的關鍵基因。

在骨科領域，也有許多用DD方法的研究，Ryoo等［11］找到了一個與成骨細胞表型發育有關的細胞增殖標志基因PROM-1（proliferatingcellmarker）。更令人鼓舞的是，Boden等［12］用一種新的骨形成蛋白LMP-1基因轉染骨髓細胞，再作局部基因治療，在動物實驗中成功地進行了脊柱融合，LMP-1基因就是用DD方法克隆出來的。

此外，DD還應用于心血管病［13］、糖尿病［14］、胚胎發育［15］、先天性疾病［16］以及藥理學［17］和眼科學［18］等。不僅用于動物和人類，還應用于植物分子生物學研究［19］。

三、存在的問題與對策

DD方法存在的問題概括起來有兩方面：一是假陽性多（約50％～70％），二是得到的有差異cDN段短（約為110～500bp）。因為這兩個問題，使許多研究者踟躕不前，這也是Debouk［3］提出質疑的原因之一。

產生假陽性的原因，在于以下4個環節：（1）提取總RNA時，有染色體DNA污染，此DNA作為模板在PCR過程中被擴增；（2）從聚丙烯酰胺膠上挑選有差異條帶時，實驗組與對照組間信號對比不夠顯著；（3）在克隆階段挑選陽性菌落時，未能排除基因克隆中的假陽性；（4）研究中多次使用PCR技術，很難避免實驗室環境中的交叉污染。

解決這一問題的對策是：（1）提取RNA操作嚴格，得到的RNA必須經過脫氧核糖核酸酶I(DNaseI)充分消化，去除染色體DNA污染。（2）從聚丙烯酰胺膠上切取有差異條帶時，首選實驗與對照間信號差異顯者，最好是互為有或無的關系；如果僅僅是強與弱的關系，放在次選位置上。（3）即使是差異顯著地顯現為一條帶，也不能肯定是由某一cDNA的均一分子泳動而成，有可能是結構不同而分子量相同的cDNA共泳動（Co-migrat）的結果。對此，可用mSSCP方法區別開來［7］。也可在基因克隆挑選時，用Reversenorthern原理作菌落原位雜交進行篩選［20］。（4）關于交叉污染問題的克服應服從分子生物學一般原則。（5）有差異基因的最終確認是用Northern雜交，如果選取了十幾或幾十條差異條帶，用Northern雜交工作量太大，若用Reversenorthern雜交則比較簡便［20］。

DD擴增片段較短(≤500bp)，且擴增片段多位于3UTR（3untranslatedregion）范圍內，很少能擴增到ORF（openreadingframe）范圍內。這一缺點是由使用的特殊引物所決定的，因此DD得到的是mRNA的標簽（tags）；由此帶來另一個問題，即這一位于3UTR范圍的標簽與Genebank數據庫比較時，多數情況是與EST（expressionseguencetags）比較，常不能滿足研究者的要求。

解決這一問題的對策是：（1）應用TargetedDD方法，基本原理是將5端引物延長，增加擴增片段的特異性［21，22］；或者用Stone和Wharton［23］報道的“targetedrNAfingerprinting”方法。這樣有可能使擴增片段特異性高，減少假陽性率，同時可能在Genebank數據庫中得到更多結構與功能方面的信息；（2）用得到的cDN段作probe篩選相應cDNA文庫，得到cDNA全序列，以便于基因結構與功能研究。

四、展望

了解細胞在某一條件下的基因表達，對闡明生命過程(如生長發育與分化、細胞凋亡與衰老等生理過程)以及炎癥、腫瘤、心腦血管疾病等病理過程極為重要。DD方法在應用中被不斷完善，同時也有更新的技術問世，如DNAmicroarrays［24］，把大量寡核苷酸片段排列在相似于一種大規模集成電路式的生物芯片上，一次可完成數量相當可觀的反應，提供的信息是目前所有基因表達研究技術不可比擬的。但是，該方法在反應信號檢測與數據處理等方面需要昂貴設備，比較起來，DD方法還是有其優越性，如果實驗設計合理，技術應用得當，相信對分子生物學研究有幫助。

參考文獻

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